轮回肿瘤 DNA（ctDNA）通过已毕对可操作突变的非侵入性、聪敏识别欧美伦理片，透彻改变了肺癌的分子会诊。然而，由于肿瘤零星的各别，ctDNA 分析可能具有挑战性，导致假阴性恶果。本考虑旨在笔据肺癌患者的临床特征了解 ctDNA 零星的决定身分，以便在临床施行中安排 ctDNA 分析时更好地评释要接洽的假阴性恶果。调治前辘集 EGFR 突变（mEGFR）IV 期 NSCLC 患者的血液样本，并监测直至疾病进展。通过圭臬设施评估组织样本的 EGFR 现象，在基线和第一次重新评估时使用 dPCR 检测 ctDNA EGFR 现象。在疾病进展时使用 NGS 评估患者的突变现象。共辘集 40 例 mEGFR 组织样本。在驱动一线调治之前，对血浆样本进行 mEGFR 分析，65% 的患者 ctDNA 检测到 mEGFR（“零星者”）。较高的 ECOG PS（p = 0.04）、双侧位置的原发肿瘤（p = 0.04）以及同期存在胸腔内/胸腔外疾病（p = 0.05）与 mEGFR 零星关系。零星者的 PFS 短于非零星者（p = 0.03）。第一次影像学评估时 ctDNA 检测到 mEGFR 的患者 PFS 短于 ctDNA 消释患者（p = 0.05）。咱们的初步数据标明，特定的临床特征可展望 NSCLC mEGFR ctDNA 零星，指示对于临床施行中了解潜在的假阴性恶果和稳妥陈诉具有潜在的临床适用性。

考虑配景

表皮滋长因子受体（EGFR）突变长短小细胞肺癌（NSCLC）中最常见的致癌驱动突变之一，在粗拙 15-40% 的肺腺癌中不雅察到。在转机性 NSCLC 中不雅察到外显子 19-21 突变，包括外显子 19 缺失亚型（ex19del）和 p.L858R，稀薄是与年青、无抽烟史和女性性别相关 。还是建立了三代 EGFR 酪氨酸激酶扼制剂（TKI）并引入临床施行，用于调治 EGFR 突变（mEGFR）肺癌，权臣改善了这些患者的临床结局。糟糕的是，患者最终会出现疾病进展。在此配景下，出现了液体活检，成为癌症会诊和监测界限的一种篡改性器具，可提供相关肿瘤空间和时代异质性的实时信息，以无创、聪敏的形状和快速盘活时代追踪分子改变。此外，液体活检克服了组织取样的局限性，包括侵入性和可行性，使其在早期肿瘤分子评估中的愚弄发生了变化。轮回肿瘤DNA（ctDNA）是指由肿瘤细胞开释并在血浆中轮回的游离DNA（cfDNA），在NSCLC中行为会诊和疾病进缓期间子评估的器具。在癌症患者中发现 ctDNA 水平升高，ctDNA 零星的加多与晚期、转机部位的数目和高肿瘤负荷关系，为了解肿瘤的异质性提供了有价值的倡导，加多了新一层的预后信息。此外，在第一次重新评估时 mEGFR湮灭（称为“ctDNA 消释”）的患者比较突变仍然存在的患者，与更好的活命结局关系。然而，ctDNA 存在局限性和挑战，稀薄是由于其品貌低，取决于肿瘤的生物学和剖解学特征，这反应在零星的高度各别上。尽头低的 ctDNA 零星可导致假阴性恶果。尽管引入了高聪敏度的 ctDNA 分析工夫，包括下一代测序（NGS）和数字团员酶链反应（dPCR），但 ctDNA 恶果的解读在考虑和临床环境中仍然是一个紧迫挑战。

在这方面，为了选择患者进行稳妥的调治并在调治历程中监测他们，在阴性恶果的情况下，更好地了解这是真阴性还长短零星肿瘤，是一个热烈未高傲的需求。

因此，本考虑旨在通过 ctDNA 分析探讨 mEGFR NSCLC 患者临床特征与其零星现象之间的关联，主张是潜入了解个体是否零星的可能性，幸免假阴性的穷苦。

考虑门径

组织检测默契 EGFR 突变的 IV 期 NSCLC 患者，行为临床施行的一部分，在一线调治前（基线时）和预定的后续时代点辘集血液样本，直至疾病进展（PD）。统统患者都继承了 EGFR-TKI 吉非替尼、阿法替尼或奥希替尼行为一线调治。

如若基线时 ctDNA 检测到至少一种激活 mEGFR，则将患者归类为“零星者”，如若基线时 ctDNA 未检测到 EGFR 激活突变，则将其归类为“非零星者”。患者也被分为基线时 ctDNA 阳性、第一次重新评估时转为阴性（消释）的患者，以及保留 mEGFR（未消释）的患者。

基线和第一次重新评估时使用数字 PCR 进行 EGFR 突变分析。疾病进展时，使用NGS进行全面突变分析。突变等位基因的浓度陈诉为等位基因分数（AF%）。

考虑恶果

基线时EGFR-cfDNA分析

本考虑纳入了组织检测默契为 IV 级 mEGFR NSCLC且为一线 EGFR-TKI 调治候选者的患者，在调治前从这些患者中共辘集了 40 例血液样本，并使用 dPCR 进行分析。用于会诊的组织辘集和液体活检样本之间的中位拒绝为 34 天（CI 5-56）；组织和液体活检评估之间未驱动调治。表 1 总结了患者的临床特征。

表1

在基线时欧美伦理片，40 例样本中有 26 例（65%）零星 mEGFR ctDNA，14 例（35%）为非零星（表 2）。发现零星现象与 ECOG 体能现象（PS）、原发肿瘤部位以及胸腔内和/或胸腔外疾病的存在之间存在统计学权臣关系性（图 1）。较差的 ECOG PS 水平（2 和 3）（p = 0.04）、双侧位置的原发肿瘤（p = 0.04）以及同期存在胸腔内和胸腔外疾病（p = 0.05）与 mEGFR ctDNA 零星相关。

表2

图1

还发现零星患者与较大肿瘤负荷（> 15 mm，中位阈值）的关系性趋势（p = 0.06）。此外，较大的疾病负荷以及同期存在胸腔内和胸腔外疾病与较高的 mEGFR AF% 关系（分裂为 p = 0.04 和 p = 0.03）（图 2A）。Logistic 转头默契零星现象与 ECOG PS、双侧位置的原发肿瘤、同期存在胸腔内和胸腔外疾病、较高的肿瘤负荷、较高的 ctDNA AF% 径直关系（图 2A）。其他临床特征（会诊年事、性别、抽烟史、原发肿瘤大小、位置和转机部位数目）与零星现象无关。已识别的展望生物绚烂物的组合，将统统特征长入在一齐，导致特异性和聪敏度更高的 ctDNA 零星展望特征（特异性 91.7%，聪敏度 61.6%，AUC 0.89）（图 2B）。

图2

零星患者的中位 PFS 权臣短于非零星患者（分裂为 15 个月和 30 个月；p = 0.03）（图 3A）。此外，在零星者中，ctDNA 中 mEGFR AF% 较高（> 0.38，中位阈值）患者的 PFS 短于 AF% 较低（≤ 0.38，中位阈值）患者（分裂为 8 个月和 35 个月；p = 0.01）（图 3B）。PFS 单变量模子默契，零星现象（HR=0.45；95% CI=0.20-0.98；p = 0.04）与 ECOG PS（HR=1.99；95% CI=1.03-3.82；p = 0.03）权臣关系（图 3D）。在多变量分析中，未证实具有统计学瞻仰的关系性（p = 0.57）。总体而言，65% 的患者基线 ctDNA 默契为 mEGFR 零星者，何况较高的 ECOG PS、双侧位置的原发肿瘤以及胸腔内/胸腔外疾病的存在与 mEGFR 零星的发生相关。

图3

第一次重新评估和疾病进展时EGFR-ctDNA分析

第一次评估期间析了 35 例患者的 ctDNA。16 例患者（45.7%）血浆 mEGFR 消释，7 例患者（20%）mEGFR 捏续存在。卡方磨真金不怕火默契，消释现象与关系临床特征无权臣关系性。与第一次重新评估时 ctDNA 捏续检测到突变的患者比较，mEGFR 消释的患者默契出更长的 PFS（分裂为 17 个月和 7 个月；p = 0.05）（图 3C）。

对 33 例患者进行监测直至疾病进展。通过 NGS 分析这些患者的全面突变谱（表 3）。在基线 EGFR 零星患者中，在 12 例患者中，ctDNA 检测到至少一种 EGFR 突变，在 4 例患者中，mEGFR 与其他突变共存（EGFR ex19del、TP53 p.H193Y 和 KRAS p.Q61H；EGFR ex19del 和 TP53 p.D149Y；p.L858R、MET CNV 和 EGFR CNV），在 2 例患者中发现 EGFR 之外的突变（TP53 p. I251M 和 MET p.M1131F；BRAF p.L485F），5 例患者 ctDNA 阴性。此外，在基线非零星患者中，在 6 例患者中，疾病进展时 ctDNA 检测到至少一种 mEGFR，在 3 例患者中，mEGFR 与其他突变共存（EGFR ex19del 和 TP53 p.D100V；EGFR ex19del、EGFR p.C797S、EGFR p.D384 V、TP53 p.V113 L、MET CNV 和 EGFR CNV；EGFR p.R958H 和 TP53 p.N235H），在 1 例患者中发现 EGFR 之外的突变（CDK6 p. A326G），1 例患者保捏 ctDNA 阴性。

表3

总体而言，检测到临床和功能关系改变，包括 EGFR 突变 ex19del（31.1%）、p. C797S（17.8%）、p.T790M（13.3%）、p.L858R（15.6%）、p.L747P（2.2%），其次是 TP53 p.V113L（2.2%）、p.H193Y（2.2%）、p.D149Y（2.2%）、BRAF p.L485F（2.2%）、KRAS p.Q61H（2.2%）、MET CNV（4.5%）和 EGFR CNV（4.5%）（图 4A）。此外，5 例 ctDNA 阳性患者检出瞻仰未明的突变，包括 EGFR p.D384V（1.7%）、EGFR p.R958H（1.7%）、CDK6 p.A326G（1.7%）、MET p.M1131F（1.7%）、TP53 p.D100V（1.7%）、TP53 p.N235D（1.7%）和 TP53 p.I251M（1.7%）（图 4B）。

图4

讨 论

液体活检投入实体瘤（包括 NSCLC）的临床施行，在疾病会诊和 PD 时用于识别展望调治灵验和耐药的生物绚烂物，匡助临床大夫选择调治门径，稀薄是一线调治后其法例。因此，正确默契妥协读液体活检恶果极为紧迫，尤其是接洽到影响 ctDNA 零星的生物学和临床身分，陈诉假阴性恶果时。在此配景下，本考虑旨在细目与零星现象关系的患者临床特征，以展望肿瘤可能是 ctDNA 零星还长短零星，幸免假阴性恶果的穷苦。既往考虑标明，与NSCLC患者ctDNA零星关系的临床特征包括肿瘤负荷、有丝分裂或代谢活性、组织学类型和肿瘤分级。识别与非零星特征关系的临床身分，对于沟通临床大夫了解液体活检恶果和选择最合适的调治门径尽头有用。

本考虑纳入了 40 例患者，在基线时辘集血浆样本并分析 ctDNA。40 例患者中有 26 例（65%）为 mEGFR 零星者，具有特定的临床特征，包括较高的 ECOG PS、双侧位置的原发肿瘤、存在胸腔内/胸腔外疾病和更差的 PFS。

EGFR 零星与较差的临床现象关系（ECOG PS 2 和 3；p = 0.04）。先前的几项考虑还是细目了 mEGFR 肺腺癌患者 ctDNA 存在突变和/或突变数目较高、ECOG PS 水平较差和活命期较短之间存在关联。此外，笔据最近的文件，同期存在胸腔外和胸腔内疾病是 EGFR-ctDNA 零星的临床展望因子（p = 0.05）。Jee 过头共事进行的一项考虑标明，74% 的肺外疾病 NSCLC 患者ctDNA阳性，而肺内疾病患者唯有 40% ctDNA阳性（p < 0.001）。此外，Passiglia 过头共事标明，无论使用哪种工夫，与仅胸腔内疾病患者比较，ctDNA 检测在胸腔外疾病 mEGFR NSCLC 患者中的可靠性、高聪敏度（约 80%）和准确性。

与非零星肿瘤比较，mEGFR 零星率更高的NSCLC 原始肿瘤体积和直径更大。相应地，咱们的考虑标明，3 例零星者具有双侧位置的肿瘤（p = 0.04），也阐扬出较大的原发疾病体积（> 33 mm）。此外，与非零星者（> 33 mm，n = 6 vs. ≤ 33 mm，n = 8）比较，大无数零星者（> 33 mm，n = 16 vs. ≤ 33 mm，n = 10）具有较大的原发性肿瘤。然而，这种各别莫得达到统计学瞻仰，可能是由于本考虑中的患者数目有限。此外，在咱们的部队中，还发现了较高疾病负荷与零星现象的关系性趋势（p = 0.06），较高的 AF% 与较大的肿瘤负荷关系（p = 0.04）。事实上，固然高 AF% 指示权臣的肿瘤负荷，但据不雅察，高肿瘤负荷并不一定能展望 ctDNA 零星，因为 ctDNA 也受疾病位置（内脏vs骨骼）的影响。几项考虑发现，在晚期 NSCLC 患者中，ctDNA mEGFR AF% 与较大的肿瘤负荷关系。在最近的文件中，未发现基线 EGFR 零星现象与临床特征（包括年事、性别以及转机部位的类型和数目）之间存在其他关联。需要强调的是，转机部位可能权臣影响 NSCLC 患者 ctDNA mEGFR 分析的准确性，即使在肿瘤负荷高的情况下亦然如斯。在咱们的部队中，大无数同期存在胸腔外和胸腔内疾病的零星患者阐扬出无为的受累，包括内脏转机（如肝脏、脾脏和肾上腺），这些部位与零星加多相关。违反，仅存在胸腔内疾病的非零星患者阐扬出淋趋附和骨转机，已知为 ctDNA 零星较低部位。对于活命率，与咱们之前在寥寂患者部队（奥希替尼行为二线调治）中进行的计整齐致，该考虑发现非零星患者的中位 PFS 更长，为 19.5 个月，而 EGFR 零星患者为 3.7 个月，本考虑数据也默契，非零星患者的 PFS 为 30 个月，零星患者为 15 个月。Verzè 过头共事的考虑也发现，零星和非零星患者的中位 PFS 存在统计学权臣各别（5 vs. 17 个月；p = 0.05）。此外，在咱们的部队中，与 mEGFR 含量较高的零星者比较，EGFR 突变 AF% 较低的零星患者（AF% ≤ 0.38，阈值）默契出更好的 PFS（p = 0.01）。与此一致，一项考虑默契，ctDNA 中 mEGFR 含量较高的患者（AF% ≥ 6.1，ROC 弧线分析生成的阈值）比较 EGFR 突变量较低的患者，阐扬出更好的 PFS（分裂为 17.8 个月和 4.3 个月；p = 0.02）和 OS（分裂为 23.6 个月和 7.7 个月；p = 0.016）。一项考虑将患者分为王人备零星者，界说为同期零星激活突变和 p.T790M 突变的患者，以及仅零星激活突变的患者，恶果默契，基线时仅零星激活突变的患者的 PFS 存在统计学权臣各别（分裂为 5.5 个月和 1.6 个月；p = 0.01）。然而，最近的考虑陈诉，在单变量模子但非多变量模子中，零星现象和 ECOG PS 亦然 PFS 的展望身分。此外，与既往计整齐致，不雅察到血浆 EGFR 突变消释的患者结局有较好的趋势（p = 0.05）。然而，莫得临床特征与消释现象关系，可能是由于该亚组分析的患者样本量小。为了全面起见，咱们还查询了 TCGA，发现了有瞻仰的关系性。

行为探索性方针，咱们分析了 EGFR-TKIs 的耐药机制。在总体东谈主群中，33 例患者出现疾病进展，咱们发现这些患者险些都（81.8%）ctDNA 至少检出一个突变，唯有 6 例患者呈阴性。大无数基线零星者在疾病进展时 ctDNA 保留了至少一个突变（n = 18）。此外，9 例基线未零星患者在进展时取得了至少一个很是的突变。耐药机制包括 EGFR 突变或触及不同通路。最近的一项考虑报谈了 14 例患者同期存在 ex19del 和 p.C797S。少数患者检测到其他临床关系变异，如 BRAF p.L485F、KRAS p.Q61H、MET CNV 和 EGFR CNV。还发现了其他瞻仰不解的突变。其中，EGFR p.R958H 和 p.D384V 突变与胚系 EGFR 关系肺癌相关。然而，现在未陈诉这些变异的发生率。在肺癌中，低水平的 CDK6 p.A326G 与较好的预后关系，而在乳头状肾细胞癌中，MET p.M1131T 会加多激酶活性并导致表型转机。此外，TP53 p.D100V、p.N235D 和 p.I251M 突变在胶质瘤、乳腺癌和儿童期肾上腺皮质癌中被解读为致病突变。

尽管与已发表的文件一致，本考虑细目了临床特征和零星现象的关系性，但存在一些局限性。除了分析的样本量小外，本考虑的一个局限性是仅在 mEGFR 肿瘤患者中评估零星。这种局限性源于通过 dPCR 评估 ctDNA 中的 EGFR 驱动突变。是以，不摒除这些患者的 ctDNA 中可能存在其他零星突变。因此，一些咱们称为“非零星者”的患者可能是 EGFR 之外突变“零星者”。基线 NGS 评估将提供这些患者更全面的突变特征。然而，为了省俭资本，在临床施行中统统患者都进行 NGS 检测并不老是可行的，当需要以较短的盘活时代以较低的资本检测一些生物绚烂物（如 EGFR）时，dPCR 门径可能有所匡助。

然而，分析这组零星患者 ctDNA EGFR 驱动突变可能提供相关要进行的调治的临床关系信息，EGFR 突变代表靶点。

陈诉中引入的肿瘤分数（TF）参数是指 ctDNA 样本中存在的肿瘤起首的遗传物资的比例或数目，科罚假阴性恶果的挑战。较高的 TF 识别具有裕如 ctDNA 量的样本，指示全面的肿瘤分析，加多与组织检测的一致性。对于液体活检恶果阴性的患者，这种门径可能减少对说明性组织检测的需要，确保实时驱动调治的信心。总之，这些数据为临床适用性提供了有价值的倡导，加强了液体活检对于检测 EGFR 突变现象的紧迫作用，提出临床大夫和实验室东谈主员仔细接洽 ECOG PS、原发肿瘤的双侧位置以及胸腔内/胸腔外疾病的存在，以便解读阴性恶果的 ctDNA 检测。

参考文件：

Martina Ruglioni， Iacopo Petrini， Stefania Crucitta， Andrea Sbrana， Giovanna Irene Luculli， Leila Sadeghi Gol， Carola Forte， Antonio Chella， Christian Rolfo， Romano Danesi， Marzia Del Re， Clinical characteristics of EGFR-ctDNA shedders in EGFR-mutant NSCLC patients欧美伦理片， Translational Oncology， Volume 52， 2025， 102228， ISSN 1936-5233， https://doi.org/10.1016/j.tranon.2024.102228.